免疫細胞的檢測方法

用體外或體內(nèi)試驗對機體的各種參與免疫應答的細胞進行鑒定、計數(shù)和功能測定，藉以了解機體的免疫狀態(tài)，并對某些臨床疾病的診斷，預后及療效觀察等也具有一定意義。

一、免疫細胞的分離

體外測定免疫細胞首先要從外周血或淋巴組織中分離所需的細胞。其主要方法是根據(jù)細胞的表面標記、理化性狀及功能等方面的差別進行設計。常用的方法有密度梯度離心法輔以花環(huán)沉降或親合板粘附法(panning)等。目前方法是用熒光激活細胞分離儀(fluorescenceactivited cell sortor，F(xiàn)ACS)可自動、快速和大量地分出各類純度高、活性強的細胞。

(一) 外周血單個核細胞的分離 
圖18.7 淋巴細胞分離(Fieoll密度梯度法)
主要方法為聚蔗糖泛影葡胺分層液(ficoll hypaque)密度梯度離心法。分離人外周血單個核細胞時，通常將分層液的比重配成1.077，肝素抗凝血置分層液上，于水平離心機2000r/min離心20分鐘，血液中各種細胞因比重不同而被分開。此外，分層劑還可選用Percoll、Metrizamid及牛血清白蛋白(BSA)等。分離不同動物血中單個核細胞時，對分離液比重的要求各不相同，如小鼠為1.088，大鼠為1.084，馬為1.090等。

(二) T、B及其他免疫細胞的純化
經(jīng)密度梯度離心法獲得的單個核細胞是不均一的細胞群，還可根據(jù)各種細胞的生物學特性、表面標記等進一步純化。例如單核細胞等具有粘附和吞噬作用，可用玻璃或塑料容器的粘壁法和吞噬羰基鐵顆粒的磁鐵吸引法除去或獲得。綿羊紅細胞能與人T細胞形成E花環(huán)，藉此可通過花環(huán)沉降法分離T與B淋巴細胞。此外，利用B細胞具有易粘附于尼龍纖維表面的特性，也可將T和B細胞分開。
為了進一步除去細胞懸液中個別細胞群，尚可將相應的單抗結(jié)合于塑料板上，利用親和層析的原理作親和板粘附法，或在細胞懸液中加入單抗和補體，以特異性地破壞相應細胞，使獲得的細胞懸液更加均一。

(三) 免疫磁珠分離法

近年來免疫磁珠法應用較多，基本方法是將特異性抗體標記在磁性珠上，當細胞與標記了特異性抗體的磁珠混合后，兩者發(fā)生結(jié)合，置于磁鐵上，吸取上清中的細胞，即可將所需的細胞分離出來。

(四) 熒光激活細胞分離儀分離法
是將熒光標記的抗體與細胞懸液混合后裝入樣品管內(nèi)，經(jīng)熒光染色后通過高速流動系統(tǒng)使細胞排成單行，一個個地流經(jīng)檢測區(qū)進行測定。當細胞從流動室噴嘴處流出時，經(jīng)超聲系統(tǒng)振蕩攪動液流，使液流斷裂成一連串均勻小滴，每小滴最多含一個細胞，在激光束照射下產(chǎn)生熒光和散射光，經(jīng)光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成脈沖信號，經(jīng)電腦處理分辨細胞類型。借助光電效應，當小滴通過電場時可出現(xiàn)不同偏向，即可收集到所需類型的細胞。該儀器能以5000個細胞/秒的速度高效分離細胞。FACS是集多項功能于一體的細胞分析儀器，除計數(shù)細胞外，還可通過熒光染色檢測細胞表面標記、細胞增殖周期、區(qū)分細胞活性、分選細胞等。